A Withania somnifera Dunal (Ashwagandha) é uma planta medicinal indiana com propriedades farmacológicas significativas, como efeitos adaptogénicos, antioxidantes, hipoglicémicos e anti-derrame. Vários dos seus quimiotipos incluem NMITLI-101, NMITLI-118, NMITLI-128. O presente trabalho elabora estudos fitoquímicos e analíticos sobre o NMITLI118RT+, um medicamento candidato ao abrigo do CSIR (derivado de um novo quimiotipo de W. somnifera). Apresentamos aqui o desenvolvimento, a validação e a aplicação de um método HPLC isocrático simples, rápido e fiável para a quantificação da Withanolide A no NMITLI118RT+ numa coluna CN, utilizando a gliclazida como padrão interno, que pode detetar a Withanolide A em cerca de 3,8 minutos e a gliclazida (padrão interno) em cerca de 4,8 minutos, com uma gama de linearidade de 2-20 g/mL. Um segundo método aqui relata o desenvolvimento e a validação de um método isocrático simples para a estimativa simultânea de Withanolide A e Withanone (marcadores de lactona sesquiterpénica) estabelecido numa coluna C-18; 3 que poderia detetar Withanolide A e Withanone em tempos de retenção de cerca de 20,7 min e 21,6 min, respetivamente, na gama de linearidade de 2-50 g/mL para ambos.